CaracterÃsticas de un vector de expresión de proteÃnas recombinantes
La construcción de un vector de expresión requiere la consideración de varios elementos con el fin de asegurar mayores niveles de producción proteica.
El mismo debe poseer un promotor “fuerte”, baja expresión basal, ser fácilmente transferible con el fin de evaluar la producción proteica en distintas cepas y tener un sistema de inducción simple y efectivo. Debe incluirse factores de terminación de la transcripción, pues éstos protegen el ARN mensajero (ARNm) de degradación exonucleotÃdica, extendiendo la vida media del mismo.
Otro factor importante a tener en cuenta en la construcción de un vector de expresión es el sitio de unión al ribosoma. La secuencia Shine-Dalgano interactúa con el extremo 3’ del ARN ribosómico 16 S (ARNr) durante el inicio de la traducción, siendo la distancia adecuada entre ésta y el codón de inicio de la traducción de ADN a proteÃna de 5 a 13 pares de bases. Esta distancia es relevante para lograr una adecuada eficiencia de la traducción. Además, debe considerarse el número de copias del plásmido , determinado por el origen de replicación, debido a que en algunos casos, plásmidos con elevado número de copia dan alta eficiencia de proteÃna expresada, pero en otros, la expresión proteica decrece cuando el número de copias plasmÃdica aumenta. Sumado a ello, se ha observado que la presencia de promotores fuertes en plásmidos con alto número de copia podrÃa interferir con la viabilidad celular.
Este artÃculo está basado en parte del trabajo de tesis de la MaestrÃa en BiotecnologÃa: “Producción de Estreptolisina-O recombinante para uso diagnóstico” realizado por Blanca Velázquez (Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Uruguay)