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Sistemas de expresión de proteínas recombinantes

Además de las estrategias generales para optimizar la expresión de un gen recombinante, es importante elegir y/o diseñar un sistema de expresión adecuado.

Los sistemas que emplean proteínas de fusión son una alternativa para expresar proteínas recombinantes con alto rendimiento, siendo apropiados además por poseer esquemas de purificación simples. En estos sistemas, la purificación, detección y seguimiento en el proceso productivo son relativamente sencillos debido a la expresión de péptidos, polipéptidos o proteínas fusionados a la proteína recombinante de interés en el extremo N o C terminal. Además el uso de estos sistemas disminuye o evita la formación de cuerpos de inclusión (agregados proteicos depositados en el citoplasma bacteriano), mejora el plegamiento molecular y limita la degradación proteolítica. Algunas de las proteínas usadas en estos sistemas de expresión son: la proteína A de estafilococo, la proteína G de estreptococo, la glutatión-S-transferasa (GST) de Schistosoma japonicum y la proteína de unión a la maltosa.

Respecto a la recuperación y purificación del producto final, el mismo varía de acuerdo al sistema empleado, dependiendo de que la proteína recombinante sea secretada, intracelular, soluble o se encuentre en cuerpos de inclusión. En el caso particular del sistema pGEX, donde el producto recombinante es expresado como proteína de fusión con la enzima GST dentro del citoplasma, la purificación es efectuada por cromatografía de afinidad con glutatión agarosa. La especificidad del sistema y las condiciones poco desnaturalizantes en la que se produce la elución, lo hacen adecuado para uso en productos de aplicación en diagnóstico. Debido a que la GST es poco inmunogénica, podría usarse la proteína de fusión entera, sin remover la porción GST, en reactivos para inmunodiagnóstico.

Autor: Blanca Velázquez

Basado en el trabajo de tesis de la Maestría en Biotecnología (Facultad de Ciencias, Universidad de la República; Uruguay).

6 Respuestas to “Sistemas de expresión de proteínas recombinantes”

  1. Por favor me podria guiar un poco, necesito elaborar un sistema de expresion de proteinas reconbinantes que permitan producir INTERFERON GAMMA RECONBINANTE para utilización con humanos… Gracias!!

  2. Estimada Estefania:

    En los bancos de datos de patentes podrás encontrar información que pueda serte de utilidad para diseñar el sistema de expresión de proteínas recombinantes, en el caso que no desees comprar los sistemas comerciales que están disponibles en el mercado.

    Atentos saludos.

  3. Hola buenas tardes, me gustaria conocer algunos métodos para la cuantificación de proteinas recombinantes o si me pudieran proporcionar alguna página donde pudiese encontrar esa información les estaria muy agradecida.
    Espero sus respuestas
    saludos!! 😀

  4. Estimada Anakaren:

    La cuantificación de proteínas recombinantes no varía respecto a otras técnicas de cuantificación de proteínas. Según el grado de pureza que tengas y el tipo de proteína que deseas cuantificar puedes usar absorbancia a 280 nm, método de Lowry, Brafdorf o también puedes emplear método del ácido bicinconínico que actualmente está disponible en kit comercial por Pierce.

    Puedes buscar información de cada uno estos métodos en internet, pudiendo elegir alguno de ellos dependiendo de las condiciones en que está la proteína ya sea recombinante o no recombinante.

    Esperamos esta guía te sea de utilidad.
    Saludos cordiales.
    El equipo de Bioero.com

  5. Hola necesito ayuda, estoy tratando de purificar una proteína, pero parece que toda la que se produce se queda en la parte insoluble de las bacterias, y necesito tenerla de manera nativa, me podrían ayudar, gracias

  6. Estimada Mabel: Debes buscar un sistema para resolubilizar los cuerpos de inclusión y evaluar si la proteína soporta el sistema de resolubilización para el uso que la requieres.

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